Una metodología estandarizada identifica el ADN del parásito causante de la leiomaniasis cutánea en muestras obtenidas de lesiones cutáneas. Fotografía: Ricardo Schmidt
Luego de nueve años de esfuerzos, expertos han completado el desarrollo de una metodología estandarizada y validada para el diagnóstico molecular de la leishmaniasis cutánea en las Américas. Los avances en el diagnóstico pueden contribuir a controlar la enfermedad, considerada desatendida por la Organización Mundial de la Salud (OMS).
La infección produce heridas en la piel, perjudicando la calidad de vida de los pacientes, tanto por el impacto de las lesiones como por el estigma. El problema se presenta en 19 países del continente, con casi 38 mil casos registrados en 2021, de los cuales 15 mil fueron en Brasil.
El desarrollo de la prueba molecular estandarizada estuvo a cargo del Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) en colaboración con la Organización Panamericana de la Salud (OPS).
En el desarrollo de la metodología colaboraron expertos de seis países: Brasil, Argentina, Bolivia, México, Panamá y Perú. La etapa inicial del proyecto también contó con la participación de investigadores de Colombia, Costa Rica y España.
La organización Medicamentos para Enfermedades Olvidadas (DNDi) apoyó la iniciativa.
La prueba molecular utiliza la técnica de PCR en tiempo real para detectar el ADN del protozoo Leishmania, parásito causante de la leishmaniasis, en muestras obtenidas de lesiones cutáneas.
Además de confirmar el diagnóstico, la metodología estandarizada permite cuantificar el volumen de parásitos presentes en la lesión.
Expertos de seis países de las Américas discutieron el protocolo del examen en un taller en Fiocruz, con la presencia de representantes de Opas y DNDi. Fotografía: Ricardo Schmidt
“La falta de métodos de diagnóstico supone un gran reto para el control de la leishmaniasis cutánea. La PCR es una metodología muy sensible que puede ayudar a esclarecer los casos sospechosos y aumentar el acceso al tratamiento de la enfermedad”, destacó el jefe del Laboratorio de Investigación de Leishmaniasis de IOC, Elisa Cupolillo, una de las coordinadoras del proyecto.
“La PCR en tiempo real puede proporcionar resultados en tan solo unas horas. Tras la pandemia de COVID-19, todos los estados brasileños y todos los países de las Américas están equipados y capacitados para el diagnóstico molecular. Este es un escenario favorable para la aplicación de este método”, afirmó el jefe del Laboratorio de Virología y Parasitología Molecular de IOC, Otacílio Moreira, también coordinador de la iniciativa.
El protocolo del examen final se estableció en un taller realizado del 7 al 9 de noviembre en el campus Fiocruz, en Manguinhos, en Río de Janeiro. La reunión reunió a 16 expertos, entre investigadores de los seis países que integran la iniciativa y representantes de la OPS y la DNDi.
En la apertura del evento, la coordinadora del Programa Regional de Leishmaniasis de la OPS, Ana Nilce Maia Elkhoury, y el subdirector de Investigación, Desarrollo Tecnológico e Innovación de la IOC, Elmo de Almeida Amaral, destacó el compromiso con la lucha contra la leishmaniasis.
“Hemos dado un paso importante para poner esta metodología a disposición de las personas afectadas por la enfermedad en nuestra región. Trabajaremos para garantizar que este progreso se aplique eficazmente en las prácticas de salud pública en las Américas”, afirmó Ana Nilce, quien forma parte del equipo de coordinación de la iniciativa.
Quisiera agradecer a todos por su compromiso con el desarrollo de esta metodología durante casi diez años. Este proyecto demuestra la importancia de las alianzas entre investigadores de las Américas y, especialmente, entre... IOC y la OPS en el contexto de la leishmaniasis”, afirmó Elmo.
Ana Nilce y Elmo destacaron la importancia de la cooperación regional para enfrentar la leishmaniasis. Fotografía: Ricardo Schmidt
La gerente de proyectos clínicos de leishmaniasis de la DNDi, Joelle Rode, destacó el papel de mejorar el diagnóstico para alcanzar la meta de controlar la enfermedad como un problema de salud pública en 2030, según lo establecido por la OMS.
“Esta metodología estandarizada es un hito en la lucha contra la leishmaniasis cutánea y puede abrir puertas para el desarrollo de pruebas rápidas en el futuro”, comentó Joelle.
El proyecto comenzó en 2014, reuniendo a expertos de diferentes países que ya utilizaban la PCR para diagnosticar la leishmaniasis cutánea con diferentes protocolos.
El primer taller del proyecto se celebró en 2016. Juntos, los científicos establecieron un protocolo de consenso para la selección y seleccionaron tres objetivos moleculares para su evaluación.
Los objetivos moleculares son las secciones del genoma detectadas en PCR. Seleccionar la región correcta es importante para que la prueba sea específica (detectando sólo parásitos del género Leishmania) y sensible (con capacidad de identificar el parásito en pequeñas cantidades y abarcando diferentes especies de Leishmania).
La validación multicéntrica de la metodología, con pruebas realizadas en siete centros de investigación, fue destacada por Otacílio y Elisa. Fotografía: Ricardo Schmidt
No IOC, la metodología fue desarrollada y probada en cepas de referencia de Leishmania, mantenidas en el laboratorio. Posteriormente se realizaron dos etapas de validación en muestras clínicas.
En el primero, los científicos de IOC Se aplicó el protocolo para diagnosticar 116 muestras obtenidas de pacientes en los seis países que componen el proyecto.
El lunes, las pruebas se repitieron en siete centros de investigación, uno en cada país extranjero y dos en Brasil. Cada centro aplicó la metodología en el diagnóstico de 40 muestras.
Participó en el proyecto: Fiocruz Rondônia y el Instituto Evandro Chagas (IEC), de Brasil; Instituto Nacional de Medicina Tropical (Inmet), de Argentina; Universidad Mayor de San Simón (UMSS), Bolivia; Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud (IGorgas), de Panamá; y la Universidad Peruana Cayetano Heredia (UPHC), de Perú.
Los resultados de las pruebas de validación fueron presentados y discutidos en el taller celebrado en FiocRuz. Con base en los resultados, los investigadores seleccionaron el mejor objetivo molecular para la metodología de PCR estandarizada, considerando las tasas de sensibilidad y especificidad observadas.
Además de discutir los resultados de las pruebas de validación de la metodología estandarizada, el taller incluyó capacitación práctica para la aplicación del protocolo. Fotografía: Ricardo Schmidt
Los coordinadores del proyecto destacan la importancia de la validación internacional de la metodología.
“La validación multicéntrica abarcó una amplia zona endémica de leishmaniasis en las Américas, desde México hasta Argentina, donde circulan varias especies de Leishmania. Observamos concordancia en los resultados incluso con diferentes métodos de recolección de muestras, equipos y software de análisis”, señaló Otacílio.
Actualmente, el diagnóstico de laboratorio de la leishmaniasis cutánea se realiza mediante la observación directa del parásito al microscopio en muestras obtenidas de lesiones cutáneas.
Considerando la mayor sensibilidad y mayor costo de la prueba molecular, la idea es que el examen se utilice de forma complementaria. Por ejemplo, para aclarar casos sospechosos de leishmaniasis cutánea con resultado negativo en el análisis microscópico.
En el futuro, la metodología también puede contribuir al seguimiento de los pacientes.
“Cuantificar la carga parasitaria puede funcionar como un marcador pronóstico, ya que observamos que esta carga está relacionada con el pronóstico de la enfermedad. Esta información puede ayudar a orientar el tratamiento”, afirma Elisa.
El informe técnico que presenta la metodología deberá ser enviado próximamente a la OPS para su difusión en la región.
Los investigadores también planean enviar un artículo científico para su publicación en una revista para compartir la información con la comunidad académica.
El proyecto continuará con el desarrollo de un kit para el diagnóstico molecular de la leishmaniasis cutánea, reuniendo todos los compuestos necesarios para la prueba en un único producto. El objetivo es hacer que el examen sea más fácil y rápido de realizar, reduciendo las posibilidades de error.
Nos últimos años, o IOC Contribuyó al desarrollo de kits para diagnóstico molecular de diversas enfermedades, incluyendo infecciones desatendidas de alto impacto en Brasil como la enfermedad de Chagas e lepra.
Una metodología estandarizada identifica el ADN del parásito causante de la leiomaniasis cutánea en muestras obtenidas de lesiones cutáneas. Fotografía: Ricardo Schmidt
Luego de nueve años de esfuerzos, expertos han completado el desarrollo de una metodología estandarizada y validada para el diagnóstico molecular de la leishmaniasis cutánea en las Américas. Los avances en el diagnóstico pueden contribuir a controlar la enfermedad, considerada desatendida por la Organización Mundial de la Salud (OMS).
La infección produce heridas en la piel, perjudicando la calidad de vida de los pacientes, tanto por el impacto de las lesiones como por el estigma. El problema se presenta en 19 países del continente, con casi 38 mil casos registrados en 2021, de los cuales 15 mil fueron en Brasil.
El desarrollo de la prueba molecular estandarizada estuvo a cargo del Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) en colaboración con la Organización Panamericana de la Salud (OPS).
En el desarrollo de la metodología colaboraron expertos de seis países: Brasil, Argentina, Bolivia, México, Panamá y Perú. La etapa inicial del proyecto también contó con la participación de investigadores de Colombia, Costa Rica y España.
La organización Medicamentos para Enfermedades Olvidadas (DNDi) apoyó la iniciativa.
La prueba molecular utiliza la técnica de PCR en tiempo real para detectar el ADN del protozoo Leishmania, parásito causante de la leishmaniasis, en muestras obtenidas de lesiones cutáneas.
Además de confirmar el diagnóstico, la metodología estandarizada permite cuantificar el volumen de parásitos presentes en la lesión.
Expertos de seis países de las Américas discutieron el protocolo del examen en un taller en Fiocruz, con la presencia de representantes de Opas y DNDi. Fotografía: Ricardo Schmidt
“La falta de métodos de diagnóstico supone un gran reto para el control de la leishmaniasis cutánea. La PCR es una metodología muy sensible que puede ayudar a esclarecer los casos sospechosos y aumentar el acceso al tratamiento de la enfermedad”, destacó el jefe del Laboratorio de Investigación de Leishmaniasis de IOC, Elisa Cupolillo, una de las coordinadoras del proyecto.
“La PCR en tiempo real puede proporcionar resultados en tan solo unas horas. Tras la pandemia de COVID-19, todos los estados brasileños y todos los países de las Américas están equipados y capacitados para el diagnóstico molecular. Este es un escenario favorable para la aplicación de este método”, afirmó el jefe del Laboratorio de Virología y Parasitología Molecular de IOC, Otacílio Moreira, también coordinador de la iniciativa.
El protocolo del examen final se estableció en un taller realizado del 7 al 9 de noviembre en el campus Fiocruz, en Manguinhos, en Río de Janeiro. La reunión reunió a 16 expertos, entre investigadores de los seis países que integran la iniciativa y representantes de la OPS y la DNDi.
En la apertura del evento, la coordinadora del Programa Regional de Leishmaniasis de la OPS, Ana Nilce Maia Elkhoury, y el subdirector de Investigación, Desarrollo Tecnológico e Innovación de la IOC, Elmo de Almeida Amaral, destacó el compromiso con la lucha contra la leishmaniasis.
“Hemos dado un paso importante para poner esta metodología a disposición de las personas afectadas por la enfermedad en nuestra región. Trabajaremos para garantizar que este progreso se aplique eficazmente en las prácticas de salud pública en las Américas”, afirmó Ana Nilce, quien forma parte del equipo de coordinación de la iniciativa.
Quisiera agradecer a todos por su compromiso con el desarrollo de esta metodología durante casi diez años. Este proyecto demuestra la importancia de las alianzas entre investigadores de las Américas y, especialmente, entre... IOC y la OPS en el contexto de la leishmaniasis”, afirmó Elmo.
Ana Nilce y Elmo destacaron la importancia de la cooperación regional para enfrentar la leishmaniasis. Fotografía: Ricardo Schmidt
La gerente de proyectos clínicos de leishmaniasis de la DNDi, Joelle Rode, destacó el papel de mejorar el diagnóstico para alcanzar la meta de controlar la enfermedad como un problema de salud pública en 2030, según lo establecido por la OMS.
“Esta metodología estandarizada es un hito en la lucha contra la leishmaniasis cutánea y puede abrir puertas para el desarrollo de pruebas rápidas en el futuro”, comentó Joelle.
El proyecto comenzó en 2014, reuniendo a expertos de diferentes países que ya utilizaban la PCR para diagnosticar la leishmaniasis cutánea con diferentes protocolos.
El primer taller del proyecto se celebró en 2016. Juntos, los científicos establecieron un protocolo de consenso para la selección y seleccionaron tres objetivos moleculares para su evaluación.
Los objetivos moleculares son las secciones del genoma detectadas en PCR. Seleccionar la región correcta es importante para que la prueba sea específica (detectando sólo parásitos del género Leishmania) y sensible (con capacidad de identificar el parásito en pequeñas cantidades y abarcando diferentes especies de Leishmania).
La validación multicéntrica de la metodología, con pruebas realizadas en siete centros de investigación, fue destacada por Otacílio y Elisa. Fotografía: Ricardo Schmidt
No IOC, la metodología fue desarrollada y probada en cepas de referencia de Leishmania, mantenidas en el laboratorio. Posteriormente se realizaron dos etapas de validación en muestras clínicas.
En el primero, los científicos de IOC Se aplicó el protocolo para diagnosticar 116 muestras obtenidas de pacientes en los seis países que componen el proyecto.
El lunes, las pruebas se repitieron en siete centros de investigación, uno en cada país extranjero y dos en Brasil. Cada centro aplicó la metodología en el diagnóstico de 40 muestras.
Participó en el proyecto: Fiocruz Rondônia y el Instituto Evandro Chagas (IEC), de Brasil; Instituto Nacional de Medicina Tropical (Inmet), de Argentina; Universidad Mayor de San Simón (UMSS), Bolivia; Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud (IGorgas), de Panamá; y la Universidad Peruana Cayetano Heredia (UPHC), de Perú.
Los resultados de las pruebas de validación fueron presentados y discutidos en el taller celebrado en FiocRuz. Con base en los resultados, los investigadores seleccionaron el mejor objetivo molecular para la metodología de PCR estandarizada, considerando las tasas de sensibilidad y especificidad observadas.
Además de discutir los resultados de las pruebas de validación de la metodología estandarizada, el taller incluyó capacitación práctica para la aplicación del protocolo. Fotografía: Ricardo Schmidt
Los coordinadores del proyecto destacan la importancia de la validación internacional de la metodología.
“La validación multicéntrica abarcó una amplia zona endémica de leishmaniasis en las Américas, desde México hasta Argentina, donde circulan varias especies de Leishmania. Observamos concordancia en los resultados incluso con diferentes métodos de recolección de muestras, equipos y software de análisis”, señaló Otacílio.
Actualmente, el diagnóstico de laboratorio de la leishmaniasis cutánea se realiza mediante la observación directa del parásito al microscopio en muestras obtenidas de lesiones cutáneas.
Considerando la mayor sensibilidad y mayor costo de la prueba molecular, la idea es que el examen se utilice de forma complementaria. Por ejemplo, para aclarar casos sospechosos de leishmaniasis cutánea con resultado negativo en el análisis microscópico.
En el futuro, la metodología también puede contribuir al seguimiento de los pacientes.
“Cuantificar la carga parasitaria puede funcionar como un marcador pronóstico, ya que observamos que esta carga está relacionada con el pronóstico de la enfermedad. Esta información puede ayudar a orientar el tratamiento”, afirma Elisa.
El informe técnico que presenta la metodología deberá ser enviado próximamente a la OPS para su difusión en la región.
Los investigadores también planean enviar un artículo científico para su publicación en una revista para compartir la información con la comunidad académica.
El proyecto continuará con el desarrollo de un kit para el diagnóstico molecular de la leishmaniasis cutánea, reuniendo todos los compuestos necesarios para la prueba en un único producto. El objetivo es hacer que el examen sea más fácil y rápido de realizar, reduciendo las posibilidades de error.
Nos últimos años, o IOC Contribuyó al desarrollo de kits para diagnóstico molecular de diversas enfermedades, incluyendo infecciones desatendidas de alto impacto en Brasil como la enfermedad de Chagas e lepra.
Se permite la reproducción del texto sin fines de lucro siempre que se cite la fuente (Comunicação / Instituto Oswaldo Cruz)
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