En respuesta al aumento de casos de fiebre amarilla, el Ministerio de Salud ha distribuido, desde 2017, más de 68 millones de dosis de la vacuna a los estados brasileños, 52 millones de dosis más que el total distribuido en 2016.
En marzo de 2018, el Ministerio anunció que todo el territorio nacional sería zona recomendada para la vacunación en abril de 2019, con la expectativa de inmunizar a más de 77 millones de personas. La vacuna, una medida central para prevenir y controlar la enfermedad, se considera segura y tiene una eficacia del 95% al 99%. Sin embargo, como cualquier vacuna o medicamento, puede provocar efectos adversos.
En estos casos raros se presentan síntomas idénticos a los de la infección natural por el virus. Para distinguir el origen del caso es necesario identificar, en el laboratorio, si el paciente tiene el virus salvaje – el que circula en un lugar determinado, transmitido por la picadura de mosquitos – o el virus atenuado – el que se utiliza en la producción de la vacuna.
Una innovación en diagnóstico molecular diseñada por el Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) y desarrollado en colaboración con la Universidad de Bonn, Alemania, permite diferenciar con precisión y mayor rapidez si el origen del caso fue una transmisión común o un evento adverso posterior a la vacunación.
La novedad fue desarrollada por el Laboratorio de Flavivirus de IOC, que actúa como referencia regional sobre fiebre amarilla ante el Ministerio de Salud.
La viróloga Ana Bispo concibió el proyecto a partir de una demanda específica.
“Hemos creado una solución que nos permite brindar respuestas más rápidas en términos de diagnóstico. Ante un brote de fiebre amarilla, la confirmación de laboratorio es una herramienta importante para definir estrategias de monitoreo de la circulación del virus y control de la enfermedad”, destacó el jefe del Laboratorio de Flavivirus.
El método diferencial, que utiliza la técnica RT-PCR en tiempo real, supera ampliamente la velocidad de la técnica tradicional de secuenciación genética de virus actualmente disponible para diferenciar entre virus salvajes y virus vacunales. Si bien la secuenciación puede durar entre tres y 15 días, el nuevo protocolo RT-PCR en tiempo real demora entre una y dos horas.
Además, puede ser realizado por un profesional que domine las técnicas básicas de diagnóstico molecular, mientras que el método de secuenciación viral requiere de profesionales con formación específica para analizar los resultados de la secuenciación del material genético del virus.
El desarrollo y validación del protocolo se describen en un artículo publicado en la revista científica ‘Emerging Infectious Diseases’, publicada por los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de Estados Unidos (CDC).
“Creamos una solución que nos permite dar respuestas más rápidas en términos de diagnóstico de la fiebre amarilla”, destaca la viróloga Ana Bispo, una de las líderes de la investigación. Foto: Gutemberg Brito
La metodología RT-PCR en tiempo real se basa en la identificación del material genético del virus en una muestra. Para llegar a una prueba precisa, los investigadores buscaron regiones del genoma donde el virus salvaje y la cepa de la vacuna son diferentes, lo que permite la diferenciación entre ambos.
Se crearon dos protocolos: el denominado protocolo ‘single target’ (cuando es necesario realizar dos reacciones separadas para detectar la presencia del virus salvaje y de la cepa vacunal) y el protocolo ‘dual target’ (cuando la detección se realiza en la misma reacción).
El protocolo demostró ser capaz de detectar el virus salvaje y el virus vacunal con alta sensibilidad y especificidad diagnósticas.
Cabe destacar un punto: para garantizar la ausencia de riesgo de reacción cruzada, se realizaron experimentos con más de 40 virus diferentes durante el desarrollo del método. Nos sorprendió gratamente poder desarrollar un método sin precedentes con alta sensibilidad, especificidad y rapidez para diferenciar entre el virus salvaje de la fiebre amarilla y el virus vacunal, celebra el investigador.
Además, el procedimiento permite cuantificar la carga viral presente en la muestra.
Actualmente, el procedimiento se está aplicando en el Laboratorio de Flavivirus de IOC Caracterizar el tipo de infección en muestras de casos sospechosos de eventos adversos posteriores a la vacunación.
El protocolo tiene el potencial de contribuir especialmente a la rutina de esclarecimiento de casos sospechosos de eventos adversos por vacunación dentro del Programa Nacional de Inmunizaciones (PNI). A solicitud de la Coordinación General de Laboratorios de Salud Pública del Ministerio de Salud (CGLAB), está en marcha la producción, en régimen de prototipo, de un kit de insumos para uso en el protocolo.
Este paso se está llevando a cabo mediante la colaboración con IOC con el Instituto de Biología Molecular de Paraná (IBMP). La perspectiva es que, en el futuro, los insumos puedan ser utilizados en la red de Laboratorios Centrales de Salud Pública (Lacens), que trabaja en el diagnóstico laboratorial de la fiebre amarilla. Para André Luiz de Abreu, de la Coordinación General de Laboratorios de Salud Pública del Ministerio de Salud (CGLAB/SVS/MS), la nueva funcionalidad podrá beneficiar la rutina de trabajo en todo el país.
“Esta es una innovación diseñada por un laboratorio de la red para mejorar el conjunto de actividades de diferenciación en el diagnóstico de la fiebre amarilla. Existe potencial para acelerar el proceso en todo Brasil”, evaluó.
El procedimiento se está aplicando en el Laboratorio de Flavivirus de IOC Caracterizar el tipo de infección en muestras de casos sospechosos de eventos adversos posteriores a la vacunación. Foto: Gutemberg Brito
Siguiendo el ejemplo de la idea sin precedentes de desarrollar una prueba rápida y sensible capaz de diagnosticar simultáneamente el zika, el dengue y el chikunguña, ya disponible en la red Lacens, la nueva propuesta desarrollada en el Laboratorio de Flavivirus representa otro logro importante para el diagnóstico de laboratorio. Una vez más, hemos logrado encontrar una solución concreta a un desafío en la rutina de los laboratorios que se ocupan del diagnóstico de estas enfermedades, explica el virólogo.
El nuevo protocolo tiene otra ventaja: ofrece resultados concluyentes incluso cuando la muestra tiene una baja concentración del virus. En estos casos, puede que no sea posible realizar el análisis tradicional directamente del material clínico, siendo necesario realizar un paso intermedio para aislar el virus, que luego se replica en el laboratorio.
Sin embargo, la situación se convierte en un problema en el caso de un paciente que tiene simultáneamente la infección salvaje y la infección por la vacuna; es decir, un paciente que es picado por un mosquito portador del virus poco antes o poco después del momento en que fue vacunado, cuando la inmunidad causada por la vacunación aún no se ha establecido.
En esta circunstancia, aumentan las posibilidades de que, debido a la etapa intermedia de aislamiento viral, sólo se detecte el virus presente en mayor cantidad en la muestra, a pesar de estar presentes ambos virus. El nuevo protocolo RT-PCR diferencial en tiempo real es capaz de detectar la presencia de ambos virus al mismo tiempo, incluso si uno de ellos está en menor concentración en la muestra del paciente.
El Laboratorio de Flavivirus del Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) trabaja regularmente desde la década de 1990 en el diagnóstico de laboratorio de muestras de pacientes sospechosos de tener la enfermedad de los estados de Río de Janeiro, Espírito Santo, Minas Gerais y Bahía.
También lleva realizando análisis de muestras de primates desde 2014.
Además, con el aumento del número de casos sospechosos desde 2017, el laboratorio también fue designado por el Ministerio de Salud para procesar muestras de Ceará y Rio Grande do Norte. Según el Ministerio de Salud, entre junio de 2016 y junio de 2017 se confirmaron en el país 777 casos y 261 muertes por fiebre amarilla. Y desde julio de 2017 hasta el 03 de abril de 2018, se han registrado 1.127 casos y 328 muertes.
En respuesta al aumento de casos de fiebre amarilla, el Ministerio de Salud ha distribuido, desde 2017, más de 68 millones de dosis de la vacuna a los estados brasileños, 52 millones de dosis más que el total distribuido en 2016.
En marzo de 2018, el Ministerio anunció que todo el territorio nacional sería zona recomendada para la vacunación en abril de 2019, con la expectativa de inmunizar a más de 77 millones de personas. La vacuna, una medida central para prevenir y controlar la enfermedad, se considera segura y tiene una eficacia del 95% al 99%. Sin embargo, como cualquier vacuna o medicamento, puede provocar efectos adversos.
En estos casos raros se presentan síntomas idénticos a los de la infección natural por el virus. Para distinguir el origen del caso es necesario identificar, en el laboratorio, si el paciente tiene el virus salvaje – el que circula en un lugar determinado, transmitido por la picadura de mosquitos – o el virus atenuado – el que se utiliza en la producción de la vacuna.
Una innovación en diagnóstico molecular diseñada por el Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) y desarrollado en colaboración con la Universidad de Bonn, Alemania, permite diferenciar con precisión y mayor rapidez si el origen del caso fue una transmisión común o un evento adverso posterior a la vacunación.
La novedad fue desarrollada por el Laboratorio de Flavivirus de IOC, que actúa como referencia regional sobre fiebre amarilla ante el Ministerio de Salud.
La viróloga Ana Bispo concibió el proyecto a partir de una demanda específica.
“Hemos creado una solución que nos permite brindar respuestas más rápidas en términos de diagnóstico. Ante un brote de fiebre amarilla, la confirmación de laboratorio es una herramienta importante para definir estrategias de monitoreo de la circulación del virus y control de la enfermedad”, destacó el jefe del Laboratorio de Flavivirus.
El método diferencial, que utiliza la técnica RT-PCR en tiempo real, supera ampliamente la velocidad de la técnica tradicional de secuenciación genética de virus actualmente disponible para diferenciar entre virus salvajes y virus vacunales. Si bien la secuenciación puede durar entre tres y 15 días, el nuevo protocolo RT-PCR en tiempo real demora entre una y dos horas.
Además, puede ser realizado por un profesional que domine las técnicas básicas de diagnóstico molecular, mientras que el método de secuenciación viral requiere de profesionales con formación específica para analizar los resultados de la secuenciación del material genético del virus.
El desarrollo y validación del protocolo se describen en un artículo publicado en la revista científica ‘Emerging Infectious Diseases’, publicada por los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de Estados Unidos (CDC).
“Creamos una solución que nos permite dar respuestas más rápidas en términos de diagnóstico de la fiebre amarilla”, destaca la viróloga Ana Bispo, una de las líderes de la investigación. Foto: Gutemberg Brito
La metodología RT-PCR en tiempo real se basa en la identificación del material genético del virus en una muestra. Para llegar a una prueba precisa, los investigadores buscaron regiones del genoma donde el virus salvaje y la cepa de la vacuna son diferentes, lo que permite la diferenciación entre ambos.
Se crearon dos protocolos: el denominado protocolo ‘single target’ (cuando es necesario realizar dos reacciones separadas para detectar la presencia del virus salvaje y de la cepa vacunal) y el protocolo ‘dual target’ (cuando la detección se realiza en la misma reacción).
El protocolo demostró ser capaz de detectar el virus salvaje y el virus vacunal con alta sensibilidad y especificidad diagnósticas.
Cabe destacar un punto: para garantizar la ausencia de riesgo de reacción cruzada, se realizaron experimentos con más de 40 virus diferentes durante el desarrollo del método. Nos sorprendió gratamente poder desarrollar un método sin precedentes con alta sensibilidad, especificidad y rapidez para diferenciar entre el virus salvaje de la fiebre amarilla y el virus vacunal, celebra el investigador.
Además, el procedimiento permite cuantificar la carga viral presente en la muestra.
Actualmente, el procedimiento se está aplicando en el Laboratorio de Flavivirus de IOC Caracterizar el tipo de infección en muestras de casos sospechosos de eventos adversos posteriores a la vacunación.
El protocolo tiene el potencial de contribuir especialmente a la rutina de esclarecimiento de casos sospechosos de eventos adversos por vacunación dentro del Programa Nacional de Inmunizaciones (PNI). A solicitud de la Coordinación General de Laboratorios de Salud Pública del Ministerio de Salud (CGLAB), está en marcha la producción, en régimen de prototipo, de un kit de insumos para uso en el protocolo.
Este paso se está llevando a cabo mediante la colaboración con IOC con el Instituto de Biología Molecular de Paraná (IBMP). La perspectiva es que, en el futuro, los insumos puedan ser utilizados en la red de Laboratorios Centrales de Salud Pública (Lacens), que trabaja en el diagnóstico laboratorial de la fiebre amarilla. Para André Luiz de Abreu, de la Coordinación General de Laboratorios de Salud Pública del Ministerio de Salud (CGLAB/SVS/MS), la nueva funcionalidad podrá beneficiar la rutina de trabajo en todo el país.
“Esta es una innovación diseñada por un laboratorio de la red para mejorar el conjunto de actividades de diferenciación en el diagnóstico de la fiebre amarilla. Existe potencial para acelerar el proceso en todo Brasil”, evaluó.
El procedimiento se está aplicando en el Laboratorio de Flavivirus de IOC Caracterizar el tipo de infección en muestras de casos sospechosos de eventos adversos posteriores a la vacunación. Foto: Gutemberg Brito
Siguiendo el ejemplo de la idea sin precedentes de desarrollar una prueba rápida y sensible capaz de diagnosticar simultáneamente el zika, el dengue y el chikunguña, ya disponible en la red Lacens, la nueva propuesta desarrollada en el Laboratorio de Flavivirus representa otro logro importante para el diagnóstico de laboratorio. Una vez más, hemos logrado encontrar una solución concreta a un desafío en la rutina de los laboratorios que se ocupan del diagnóstico de estas enfermedades, explica el virólogo.
El nuevo protocolo tiene otra ventaja: ofrece resultados concluyentes incluso cuando la muestra tiene una baja concentración del virus. En estos casos, puede que no sea posible realizar el análisis tradicional directamente del material clínico, siendo necesario realizar un paso intermedio para aislar el virus, que luego se replica en el laboratorio.
Sin embargo, la situación se convierte en un problema en el caso de un paciente que tiene simultáneamente la infección salvaje y la infección por la vacuna; es decir, un paciente que es picado por un mosquito portador del virus poco antes o poco después del momento en que fue vacunado, cuando la inmunidad causada por la vacunación aún no se ha establecido.
En esta circunstancia, aumentan las posibilidades de que, debido a la etapa intermedia de aislamiento viral, sólo se detecte el virus presente en mayor cantidad en la muestra, a pesar de estar presentes ambos virus. El nuevo protocolo RT-PCR diferencial en tiempo real es capaz de detectar la presencia de ambos virus al mismo tiempo, incluso si uno de ellos está en menor concentración en la muestra del paciente.
El Laboratorio de Flavivirus del Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) trabaja regularmente desde la década de 1990 en el diagnóstico de laboratorio de muestras de pacientes sospechosos de tener la enfermedad de los estados de Río de Janeiro, Espírito Santo, Minas Gerais y Bahía.
También lleva realizando análisis de muestras de primates desde 2014.
Además, con el aumento del número de casos sospechosos desde 2017, el laboratorio también fue designado por el Ministerio de Salud para procesar muestras de Ceará y Rio Grande do Norte. Según el Ministerio de Salud, entre junio de 2016 y junio de 2017 se confirmaron en el país 777 casos y 261 muertes por fiebre amarilla. Y desde julio de 2017 hasta el 03 de abril de 2018, se han registrado 1.127 casos y 328 muertes.
Se permite la reproducción del texto sin fines de lucro siempre que se cite la fuente (Comunicação / Instituto Oswaldo Cruz)
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